[SPR] Questions chapitre 1 - Intro à la biologie

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Scheick
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Re: [SPR] Questions chapitre 1 - Intro à la biologie

Message par Scheick »

Bonsoir
On va développer un peu :)
Le pulse-chase se fait en 2 étapes, le pulse, puis le chase.

Le pulse: On met les cellules dans un milieu de culture possédant un précurseur des protéines, un acide aminé, dit marqué car pouvant être repéré grâce à sa radioactivité. La cellule ne sait absolument pas que l'AA est radioactif, elle l'intègre tout naturellement à la structure des protéines qu'elle synthétise.

Supposons que cet AA soit la Tyrosine, toute les protéines qui en contiennent pourrons être repérées grâce à leur radioactivité, les autres qui n'en contiennent pas ne seront pas repérées par cette technique.

Le chase: C'est justement l'étape où on va repérer et suivre le devenir de la protéine qui a intégré l'AA radioactif grâce à sa radioactivité. Pour cela, on replace les cellules dans un milieu de culture qui ne contient plus l'AA radioactif, puis on attend en regardant :)

C'est plus clair?
DFGSP2
dolores
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Re: [SPR] Questions chapitre 1 - Intro à la biologie

Message par dolores »

Ok !!! Ah oui là je comprend mieux merci bcp !!
Alanine
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Re: [SPR] Questions chapitre 1 - Intro à la biologie

Message par Alanine »

Bonjour a tous je vais poser ma petite question ici même si le SPR est passé depuis un petit moment il y a un petit détail qui me chagrine, en MET ou MEB les cellules ne sont pas fixés ? de même en microscopie a fluorescence dans le cas ou l'on applique une Transfection ,ect ça n'affecte pas la cellule (par contre en immunofluoresce ont la cellule n'est pas vivante ? )
batata
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Re: [SPR] Questions chapitre 1 - Intro à la biologie

Message par batata »

Bonjour
Alanine a écrit :Bonjour a tous je vais poser ma petite question ici même si le SPR est passé depuis un petit moment il y a un petit détail qui me chagrine, en MET ou MEB les cellules ne sont pas fixés ? de même en microscopie a fluorescence dans le cas ou l'on applique une Transfection ,ect ça n'affecte pas la cellule (par contre en immunofluoresce ont la cellule n'est pas vivante ? )
d'après ce que j'ai compris justement pour la transfection la micro injection et l'electroporation les cellules ne sont pas fixées car on veut observer la dynamique de la cellule et donc les cellules sont vivantes (on utilise le microscope à fluorescence) et sinon pour l'immunofluorescence, on perméabilise les cellules du coup les cellules ne sont pas vivantes !!

J'espère que j'ai assez bien répondu à ta question mais je laisse un tuteur confirmer :)
VP Publis
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DDJ
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Re: [SPR] Questions chapitre 1 - Intro à la biologie

Message par DDJ »

En microscope electronique, la cellule est toujours fixée !
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Adriiien
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Re: [SPR] Questions chapitre 1 - Intro à la biologie

Message par Adriiien »

Microscopie electronique = cellule fixée = cellule morte (mais cela ne veut pas dire qu'elle etait morte avant qu'on la regarde au microscope! mais pour la regarder,on la fixe)
Immunofluorescence= il me semble que quand on regarde on permeabilise la cellule donc morte aussi ( a confirmer)
L'utilisation du micro a fluorescence va permettre de suivre dans le temps des cellules marquées par des agents fluorescents, cellules vivantes
Tuteur Chimie G et Biocell (et ouai on peut faire les deux :p)
Alanine
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Re: [SPR] Questions chapitre 1 - Intro à la biologie

Message par Alanine »

Merci pour vos précision :D
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[Estelle]
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Re: [SPR] Questions chapitre 1 - Intro à la biologie

Message par [Estelle] »

Adriiien a écrit :Microscopie electronique = cellule fixée = cellule morte (mais cela ne veut pas dire qu'elle etait morte avant qu'on la regarde au microscope! mais pour la regarder,on la fixe)
Immunofluorescence= il me semble que quand on regarde on permeabilise la cellule donc morte aussi ( a confirmer)
L'utilisation du micro a fluorescence va permettre de suivre dans le temps des cellules marquées par des agents fluorescents, cellules vivantes
Il y a une vraie différence entre l'immunofluorescence et l'immunocytochimie ?

Et il y a quelque chose que je ne comprends pas à propos de l'IF:

- Sur le diapo, en effet, la C est perméabilisée, et donc morte.
- Mais lorsque on utilise la méthode d'éléctroporation, micro-injection, transfection, la C reste vivante ?

Donc pour l'immunofluorescence, ça dépendrait de la méthode d'injection des Ig ?
claraa
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Re: [SPR] Questions chapitre 1 - Intro à la biologie

Message par claraa »

Coucou!

Pour l'immunofluorescence, la cellule est bien fixée donc morte.
Les trois techniques (électroporation, transfection,...) permettent d'injecter un plasmide dans une cellule et de lui faire produire des protéines fluorescentes (si ça a pas changé depuis ma p1!). Et pour ces techniques là, la cellule reste vivante. Si jamais tu as encore des doutes (je sais pas ce que T. a dit en cours cette année) demande aux profs de TD!

L'immunocytochimie est une technique globale qui englobe l'immunofluorescence. En fait, avec l'immunocytochimie, tu peux insérer des AC couplés à des billes d'or par exemple et donc les observer au microscope électronique.
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[Estelle]
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Re: [SPR] Questions chapitre 1 - Intro à la biologie

Message par [Estelle] »

Donc en gros, si c'est avec des anticorps > cellule fixee.
Si c'est avec des plasmides > cellule vivante.

Merci :)
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